Главная / Продукт / Анализ с помощью микрочипа /

Протокол использования микрочипа

Протокол использования микрочипа для клинической лабораторной диагностики 

1. Отделите сыворотку крови от форменных элементов крови по стандартному протоколу;
2. Поместите микрочипы и сыворотки в роботизированную гибридизационную станцию;
3. По завершении процесса гибридизации измерьте интенсивность флуресценции с помощью ридера для гликочипов;
4. Преобразуйте полученные изображения в таблицу Excel с помощью программного обеспечения ридера и GAL.-файла
5. Полученные данные проанализируйте с помощью программного пакета "Семиотик" на PC (релиз в 2018 г.).  


Протокол использования гликочипов для научных исследований в ручном режиме

Протокол использования микрочипов
(без использования роботизированной гибридизационной станции)


1. Чипы выдержать в течение 15 мин в 0,1 М изотоническом фосфатном буфере (ИФБ), содержащем 0,1%-ый Tween20 (ICN, США) (0,1%-ый ИФБ);

2. Развести сыворотку крови в соотношении 1 : 15 в 0,1%-ном ИФБ, содержащим 3% БСА и выдержать 10 мин при 37°С;

3. Отцентрифугировать в течение 15 мин на 12 000 об/мин;

4. Отобрать верхнюю фракцию и нанести на Микрочип;

5. Чип выдержать на шейкере при относительной влажности 80% в течение 1.5 ч при 37°C;

6. После чего промыть микрочипы 0,05%-ым ИФБ и прибавить раствор биотинилированных антител козы, узнающих человеческие IgG, M и A, разведенные 0,1%-ным ИФБ, либо раствор, содержащий антитела козы, узнающие человеческий IgG, меченые Alexa555 (Cy3 или аналогичным) и человеческий IgM, меченные Alexa647 (Cy5 или аналогичным), разведенные 0,1%-ным ИФБ;

7. Проинкубировать микрочип на шейкере при относительной влажности 80% в течение 1 ч при 37°C в отсутствии света;

8. Затем, в случае биотинилированных вторичных антител, прибавить раствор флуоресцентно меченного (Alexa 555 (Cy3 или аналогичным) или Alexa 647(Cy5 или аналогичным) стрептавидина, разведенные 0,1%-ным ИФБ, и выдержать 0,5 ч при комнатной температуре в отсутствие света;

9. По окончании инкубации гликочип промыть сначала 0,05%-ым ИФБ, а затем бидистиллированной водой;

10. Далее высушить центрифугированием или в токе азота;

11. Измерьте интенсивность флуоресценции  с помощью ридера для микрочипов;

12. Преобразуйте полученные изображения в таблицу Excel с помощью программного обеспечения ридера и GAL.-файла (поставляется вместе с чипом);

13. Полученные данные проанализируйте с помощью программного пакета "Семиотик" на PC (доступен для зарегистрированных пользователей).



Протокол использования микрочипов
(с использованием роботизированной гибридизационной станции)

1. Отделите сыворотку крови от форменных элементов по стандартному протоколу;
2. Поместите чипы и сыворотки в роботизированную гибридизационную станцию;
3. По завершении процесса гибридизации в станции измерьте интенсивность флуоресценции с помощью ридера для микрочипов;
4. Преобразуйте полученные изображения в таблицу Excel с помощью программного обеспечения ридера и GAL.-файла (поставляется вместе с чипом);
5. Полученные данные проанализируйте с помощью программного пакета "Семиотик" на PC (доступен для зарегистрированных пользователей).  


Приготовление буферов для научных исследований


Приготовление изотонического фосфатного буфера

На лабораторных весах взвесить 8,00 г NaCl химически чистого, 0,27 г калия фосфорнокислого однозамещенного химически чистого, 0,20 г калия хлористого химически чистого, 3,58 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного химически чистого. Взвешенные препараты перенести в бутыль вместимостью 1000 мл и долить 900-950 мл 0.6 л воды MilliQ (сопротивление 18.2 МОм*см). После растворения реактивов объем раствора довести водой до метки и при необходимости подтитровывают до рН 7,4. Перед каждой последующей манипуляцией с буфером его необходимо пропустить через фильтр 0.22 мкм. Концентрации компонентов в полученном буфере приведены в Таблице.

Таблица. Концентрация компонентов в изотоническом фосфатном буфере

Компонент

Концентрация

KH2PO4

2 мM

Na2HPO4x7H2O

10 мM

NaCl

137 мM

KCl

2,7 мM


Полученный раствор пригоден к употреблению в течение недели, хранение +4°С

Приготовление изотонического фосфатного буфера, содержащего 0.1% Tween 20

К 1 л профильтрованного изотонического фосфатного буфера (ИФБ) прибавить 1,0 мл Tween 20. Перемешивать до полного растворения. Полученный раствор пригоден к употреблению в течение недели, при хранении при +4°С.

Приготовление изотонического фосфатного буфера, содержащего 0.05% Tween 20

К 1 л профильтрованного ИФБ прибавить 0,5 мл Tween 20. Перемешивать до полного растворения. Полученный раствор пригоден к употреблению в течение недели, при хранении при +4°С.

Приготовление изотонического фосфатного буфера, содержащего 0.1% Tween 20 и 3% бычьего сывороточного альбумина

На лабораторных весах взвесить 3 г бычьего сывороточного альбумина, а на аналитических весах взвесить 10 мг азида натрия. Перенести взвешенные компоненты его в бутыль на 125 мл и долить предварительно профильтрованный ИФБ, содержащего 0,1% Tween 20 до 70 мл. Перемешивать до полного растворения и довести полученный объем до 100 мл. Готовить непосредственно перед применением.


Примечания

Для стандартизации условий проведения научных исследований рекомендуется использовать гибридизационные станции.

По всем возникающим вопросам – обращайтесь по адресу support@semiotik-array.com.